微生物限度檢測(cè)是一種在生物制藥、醫(yī)療器械、化妝品企業(yè)、食品飲料、醫(yī)療疾控、第三方檢測(cè)、檢驗(yàn)檢疫等單位機(jī)構(gòu)中廣泛進(jìn)行的，主要是用來評(píng)估藥品、食品飲料、生物制劑、化妝品、醫(yī)療器械等產(chǎn)品中微生物污染程度的質(zhì)量控制方法。可以檢測(cè)樣品中需氧菌、霉菌、酵母菌總數(shù)，以及特定致病菌——如大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等特定病原微生物的存在，目的是確保產(chǎn)品中的微生物數(shù)量在安全范圍內(nèi)，避免對(duì)消費(fèi)者和使用者健康造成危害。更具體的來講，在制藥行業(yè)，能確保無菌或微生物限度，符合中國藥典、美國FDA等各國藥品監(jiān)督的要求；在食品飲料生產(chǎn)時(shí)，保障出廠的產(chǎn)品安全，防止微生物污染印發(fā)的健康風(fēng)險(xiǎn)；在化妝品企業(yè)，確保產(chǎn)品微生物指標(biāo)符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范。

        進(jìn)行微生物限度檢測(cè)的主要幾種方法有以下幾種：平皿計(jì)數(shù)法，直接通過培養(yǎng)基培養(yǎng)并計(jì)數(shù)微生物；最可能數(shù)法，是通過統(tǒng)計(jì)方法估算微生物數(shù)量；快速檢測(cè)法，如PCR、ATP生物發(fā)光法等，用于快速篩查；膜過濾法，適用于液體樣品，過濾后培養(yǎng)并計(jì)數(shù)。

        在上述幾種方法中，平皿法通常用于不可過濾的固體或高黏度樣品，或者少量的濾液（10ml以下）；最可能數(shù)法由于通過統(tǒng)計(jì)的方法估算的數(shù)值，結(jié)果準(zhǔn)確度低。 目前使用較多的是膜過濾法，其在微生物檢測(cè)中具有顯著優(yōu)勢(shì)。其原理是將一定量的待檢測(cè)液體樣品，倒入過濾杯中，使用真空泵產(chǎn)生的負(fù)壓吸引力，使液體能通過濾膜，微生物被截留在膜上，然后將濾膜置于培養(yǎng)基上培養(yǎng)，最后計(jì)數(shù)形成的菌落。所以濾膜法能夠富集樣品中的微生物，即使微生物濃度很低（如1 CFU/100mL），也能通過增加過濾液體的總?cè)萘縼硖岣邫z測(cè)靈敏度。

      在具體準(zhǔn)備過濾裝置時(shí)，應(yīng)當(dāng)注意過濾裝置的聯(lián)數(shù)，聯(lián)數(shù)是指單次可以同時(shí)過濾的樣品數(shù)量。例如R300B單聯(lián)微生物檢測(cè)抽濾裝置，采用的是常規(guī)的上方過濾漏斗，連接底部集液瓶的結(jié)構(gòu)形式，濾液通過濾膜后直接流入底部試劑瓶待實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處理，抽濾瓶帶有接口連接真空泵來進(jìn)行抽氣形成負(fù)壓吸引力。單聯(lián)過濾裝置結(jié)構(gòu)簡單，整體尺寸小巧，占用空間少，每次過濾一組樣品，較為適合檢測(cè)樣品量不大的用戶。

       而針對(duì)大型企業(yè)，或者是疾控、第三方檢測(cè)等單位，由于檢測(cè)樣品數(shù)量多，如果每次只能過濾一組樣品，效率低下。這時(shí)候就可以使用多聯(lián)過濾系統(tǒng)，它是通過一組使用金屬材質(zhì)制作的過濾支架，將多組過濾杯連接起來，使其可以通過同一臺(tái)真空泵來抽氣產(chǎn)生負(fù)壓吸力。典型的如BV-321-A三聯(lián)式和BV-621A六聯(lián)式微生物限度檢測(cè)真空抽濾系統(tǒng)，可以同時(shí)過濾3組或6組樣品。支架采用耐腐蝕的陽極鋁合金材質(zhì)制作，對(duì)應(yīng)插入3或6支過濾漏斗，漏斗中間放置濾膜。支架側(cè)邊帶有接口連接一個(gè)大容量的集液瓶，濾液通過濾膜后流入集液瓶內(nèi)暫存，集液瓶底部帶快速排液口，瓶滿后松開排液管夾可以快速導(dǎo)出濾液，不需要停下工作打開集液瓶蓋的繁復(fù)操作。集液瓶的頂部有2個(gè)接口，一個(gè)連接支架、另一個(gè)接抽濾泵，這樣即可以實(shí)現(xiàn)1臺(tái)泵搭配1只集液瓶，同時(shí)處理數(shù)個(gè)過濾漏斗內(nèi)的樣品，大幅提升過濾效率。

       在選擇合適的機(jī)型后，具體進(jìn)行檢測(cè)大致包含以下步驟：

1. 準(zhǔn)備濾膜：選擇合適的濾膜并滅菌，也可以直接選購已經(jīng)伽馬射線（輻照）滅菌的無菌包裝過濾膜。濾膜材質(zhì)通常推薦使用MCE混合纖維素材料。直徑根據(jù)過濾裝置的漏斗大小來選擇，一般為47或50mm較為常見?？臻g根據(jù)需要檢測(cè)的微生物來覺得，一般為0.22或0.45微米。推薦使用帶網(wǎng)格線的過濾膜，便于計(jì)數(shù)時(shí)的觀察。

2. 過濾樣品：將液體樣品通過濾膜過濾，微生物被截留。具體根據(jù)選擇的過濾裝置型號(hào)參加說明書操作。

3. 轉(zhuǎn)移濾膜：將濾膜移至適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上。

4. 培養(yǎng)：在適宜條件下培養(yǎng)，使微生物生長。

5. 計(jì)數(shù)：培養(yǎng)結(jié)束后，計(jì)數(shù)濾膜上的菌落數(shù)。